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創(chuàng)想GLMY高效液相色譜儀有哪些部件?

發(fā)布時(shí)間:2020-08-28 08:32:00         點(diǎn)擊:4947

       高效液相色譜儀主要有進(jìn)樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、.分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),下面將分別敘述其各自的組成與特點(diǎn)。


1.進(jìn)樣系統(tǒng)

       一般采用隔膜注射進(jìn)樣器或高壓進(jìn)樣間完成進(jìn)樣操作,進(jìn)樣童是恒定的。這對(duì)提高分析樣品的重復(fù)性是有益的。

2.輸液系統(tǒng)

       該系統(tǒng)包括高壓泵、流動(dòng)相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強(qiáng)為1.47~4. 4X107Pa,流速可調(diào)且穩(wěn)定,當(dāng)高壓流動(dòng)相通過層析柱時(shí),可降低樣品在柱中的擴(kuò)散效應(yīng),可加快其在柱中的移動(dòng)速度,這對(duì)提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。流動(dòng)相貯存錯(cuò)和梯度儀,可使流動(dòng)相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變,包括改變洗脫液的極性、離子強(qiáng)度、PH值,或改用競爭性抑制劑或變性劑等。這就可使各種物質(zhì)(即使僅有個(gè)基團(tuán)的差別或是同分異構(gòu)體)都能獲得有效分離。

3.分離系統(tǒng)

       該系統(tǒng)包括色譜柱、連接管和恒溫器等。色譜柱一般長度為10~50cm (需要兩根連用時(shí),可在二者之間加一連接管),內(nèi)徑為2~5mm,由"優(yōu)質(zhì)不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成,住內(nèi)裝有直徑為5~ 10μm粒度的固定相(由基質(zhì)和固定液構(gòu)成).固定相中的基質(zhì)是由機(jī)械強(qiáng)度高的樹脂或硅膠構(gòu)成,它們都有惰性(如硅膠表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性(孔徑可達(dá)1000?)和比表面積大的特點(diǎn),加之其表面經(jīng)過機(jī)械涂漬(與氣相色譜中固定相的制備一樣),或者用化學(xué)法偶聯(lián)各種基因(如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長度碳鏈的烷基等)或配體的有機(jī)化合物。因此,這類固定相對(duì)結(jié)構(gòu)不同的物質(zhì)有良好的選擇性。例如,在多孔性硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素(PSA)后,就可以把成纖維細(xì)胞中的一種糖蛋白分離出來。

       另外,固定相基質(zhì)粒小,柱床極易達(dá)到均勻、致密狀態(tài),極易降低渦流擴(kuò)散效應(yīng)?;|(zhì)粒度小,微孔淺,樣品在微孔區(qū)內(nèi)傳質(zhì)短。這些對(duì)縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的。根據(jù)柱效理論分析,基質(zhì)粒度小,塔板理論數(shù)N就越大。這也進(jìn)一步證明基 質(zhì)粒度小,會(huì)提高分辨率的道理。

再者,高效液相色譜的恒溫器可使溫度從室溫調(diào)到60C,通過改善傳質(zhì)速度,縮短分析時(shí)間,就可增加層析柱的效率。

創(chuàng)想GLMY高效液相色譜儀

創(chuàng)想GLMY高效液相色譜儀

(1)紫外檢測器

       該檢測器適用于對(duì)紫外光(或可見光)有吸收性能樣品的檢測。其特點(diǎn):使用面廣(如蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用) ;靈敏度高(檢測下限為10-10g/ ml) ;線性范圍寬;對(duì)溫度和流速變化不敏感;可檢測梯度溶液洗脫的樣品。

(2)示差折光檢測器

       凡具有與流動(dòng)相折光率不同的樣品組分,均可使用示差折光檢測器檢測。目前,糖類化合物的檢則大多使用此檢測系統(tǒng)。這一系統(tǒng)通用性強(qiáng)、操作簡單,但靈敏度低(檢測下限為10-7g/ml),流動(dòng)相的變化會(huì)引起折光率的變化,因此,它既不適用于痕量分析,也不適用于梯度洗脫樣品的檢測。

(3)熒光檢測器

       凡具有熒光的物質(zhì),在一定條件下,其發(fā)射光的熒光強(qiáng)度與物質(zhì)的濃度成正比。因此,這一檢測器只適用于具有熒光的有機(jī)化合物(如多環(huán)芳烴、氨基酸、胺類、維生素和某些蛋白質(zhì)等)的測定,其靈敏度很高( 檢測下限為10-12~ 10-14g/ml),痕童分析和梯度洗脫作品的檢測均可采用。

(5)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)

       該系統(tǒng)可對(duì)測試數(shù)據(jù)進(jìn)行采集、貯存、顯示、打印和處理等操作,使樣品的分離、制備或鑒定工作能正確開展。

 

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